本文標(biāo)題："國產(chǎn)觀察生物細(xì)胞分析測量光學(xué)顯微鏡-上海光學(xué)儀器一廠"
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軟體基本操作（Single Scan）：
(一)初步掃瞄分析：進(jìn)入軟體后，可看見如下圖所示之控制區(qū)。
1.先點(diǎn)選”Acquire”，再點(diǎn)選”Beam”，之后會(huì)出現(xiàn)一”Parameter Setting”
的視窗，
各項(xiàng)重要欄位說明如下：
A：此區(qū)域是顯示電腦中已有的設(shè)定檔案，其中紅色 L 標(biāo)記的是系統(tǒng)
預(yù)設(shè)值，通常都是選用預(yù)設(shè)值檔案即可，例如樣本有 FITC 及
TRITC 兩種螢光物質(zhì)，就選擇檔案中的”L FITC_TRITC”即可，
此時(shí)系統(tǒng)就會(huì)自動(dòng)將激光開啟至適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度以及調(diào)整適當(dāng)?shù)墓?/div>
譜范圍。另外藍(lán)色 U 標(biāo)記的是使用者的設(shè)定值，可由使用者自行
修改存檔（預(yù)設(shè)值則是無法修改存檔）
B：顯示所開啟的激光波長及強(qiáng)度，可視情況做調(diào)整。
C：紅色框框中，藍(lán)、綠、黃及紅線各是標(biāo)示出激光激發(fā)波長，而虛
線則是螢光釋放波長。
D：光譜范圍調(diào)整區(qū)，可依照需求作調(diào)整。
E：將”Active”勾選，即是選用螢光感測用 PMT。
F：穿透光感測用 PMT。
G：由于掃瞄所得之圖片是黑白的，所以必須要套色才能更明顯顯現(xiàn)
出樣本的螢光分佈，可以點(diǎn)選此區(qū)進(jìn)行套色，一般第一次掃瞄
時(shí)，為了得到正確的螢光亮度，會(huì)先選擇”Glow(O)”，訊號(hào)若太
強(qiáng)的區(qū)域就會(huì)顯現(xiàn)藍(lán)色，此時(shí)調(diào)整 PMT 的大小或是激光的強(qiáng)
度，直到圖像中所有的藍(lán)色區(qū)域剛剛好不見為止，此時(shí)訊號(hào)強(qiáng)度
較為適當(dāng)。
H：以上所有的設(shè)定值設(shè)定完畢后，若常需使用類似之設(shè)定值，可點(diǎn)
選此鈕進(jìn)行存檔，存檔后就可以在 A 區(qū)的”User”中看到檔案，下
一次工作時(shí)點(diǎn)選該檔案即可進(jìn)入自己所設(shè)定之狀態(tài)。
2.以上設(shè)定完成后，即可點(diǎn)選控制區(qū)中的”Singal Scan”，進(jìn)行掃瞄。
得到的結(jié)果會(huì)出現(xiàn)在右邊的螢?zāi)唬ㄓ跋裾{(diào)控視窗）上，如下圖。
3.影像調(diào)控視窗預(yù)設(shè)值是只顯示一個(gè)掃瞄結(jié)果畫面，如欲觀察兩種以
上的螢光，則需增加其他畫面，方法是點(diǎn)選調(diào)控視窗左側(cè)之選擇鍵
Ch1~3，數(shù)字代表畫面的數(shù)目；另有一個(gè)選擇鍵為 Overl.，功能是
將 CH1~3 進(jìn)行疊合，并將結(jié)果顯示在第四個(gè)畫面（右下角）。
3D series / 連續(xù)斷層影像擷取及制作
擷取
1. 基本設(shè)定完成且可掃瞄后,始可使用連續(xù)掃描
2. 連續(xù)掃描時(shí), 調(diào) Z-焦距, 找出上點(diǎn), 在 Begin 按一下
3. 再找出下點(diǎn), 然后在 End 按一下
4. 后又于 連續(xù)掃描框內(nèi)按一下
5. 再選切片數(shù)目, 平均數(shù)目, 按 Series 光切掃描.
6. 連續(xù)掃描完成,儲(chǔ)存檔案
可配合
Averaging以消
除雜訊
每一切片的影像
要做平均處理
嗎 ?
決定光切數(shù)目
Z-focus
PMT Gain 1/2/3/4
Pinhole
Zoom
Page 13
制作
1. 點(diǎn)選3D,再點(diǎn)選Projection & Animation
2. 開啟連續(xù)掃描檔
3. 設(shè)定各個(gè)參數(shù)
4. 點(diǎn)選Prev察看結(jié)果
5. 若結(jié)果滿意即可點(diǎn)選Apply,并將結(jié)果存檔
Page 14
Timelapse / 長時(shí)間掃描記錄
♦ 點(diǎn)選 Mode,再點(diǎn)選有 t 參數(shù)之選項(xiàng)目
♦ 依據(jù)所選之選項(xiàng)設(shè)定所須之參數(shù),點(diǎn)選 Apply
Line-Mode „xt“ Configuration
Stack-Mode „xyt“ Configuration
Stack-Mode „xyzt“ Configuration
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如何去除 cross talk
1. λ scanning (Lambda Scanning)
# 選擇要測試的螢光物質(zhì)吸光范圍 (e.g. FITC)
# λ beg. 500nm; λ End 700nm
# 在此波長范圍內(nèi), 選擇要掃描幾次 (λ Step)
# 分析
選擇Quantify Pr (Z), 知道高吸收波長落于何處, 可作為選取吸收波長范
圍之依據(jù)
# 注意事項(xiàng)
此功能一次僅能做單一波長校正
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2. Sequential Scan
# 利用 λ scan 訂出佳吸收波長后, 將 condition 儲(chǔ)存
# 勾選 Sequential Scan 選項(xiàng)
# 將儲(chǔ)存的 condition 檔依需要拖曳至下方
# 選擇 between frames
# 點(diǎn)選 series 按鍵開始 scan
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